PCR儀的一些相關(guān)知識(shí)介紹

更新時(shí)間：2020-11-14

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　　PCR是聚合酶鏈反應(yīng)的簡稱，是在短時(shí)間內(nèi)體外大量擴(kuò)增特定的DNA片段的分子生物學(xué)技術(shù)。自動(dòng)完成聚合酶鏈反應(yīng)，提供DNA擴(kuò)增的溫度條件而設(shè)計(jì)的儀器稱為PCR儀。

　　PCR儀主要用于DNA片段的放大，可將DNA分子或某一DNA片段于數(shù)小時(shí)內(nèi)擴(kuò)增至十萬乃至百萬倍，在這過程中主要是3個(gè)特征溫度循環(huán)：

　　1、高溫變性：把樣品加熱至90～95℃讓DNA模板變性變成單鏈。

　　2、低溫退火：讓樣品的溫度迅速下降至50～65℃,引物就可以結(jié)合到模板上去。

　　3、適溫延伸：讓樣品的溫度上升至70～75℃,DNA聚合酶就可以從引物開始用底物復(fù)制出新鏈。

　　因此，在PCR反應(yīng)過程中對(duì)溫度控制的要求很高，良好的溫度控制是PCR儀質(zhì)量好壞的關(guān)鍵。

　　基因擴(kuò)增的基本要素：

　　1、DNA模板：待拷貝的DNA稱為模板，它可以是雙鏈DNA也可是單鏈DNA，Z后擴(kuò)增得到的產(chǎn)物是雙鏈狀態(tài)的。

　　2、引物：是DNA復(fù)制的先鋒，就象結(jié)晶過程中的晶核，引導(dǎo)DNA的合成。在PCR擴(kuò)增中一般使用合成的寡核苷酸作引物。

　　3、DNA聚合酶(TaqDNA聚合酶)：是DNA復(fù)制的動(dòng)力，在dNTP等底物存在時(shí)在引物的引導(dǎo)下沿著模板DNA合成互補(bǔ)的DNA鏈。

　　4、緩沖液：提供DNA合成反應(yīng)所需的pH，離子強(qiáng)度等環(huán)境。

　　5、4種單核苷酸：dNTP，提供DNA合成原料。

　　PCR儀用途：

　　1、醫(yī)學(xué)和健康檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)臨床診斷，用于判斷檢體中是否會(huì)表現(xiàn)某遺傳疾病的圖譜、傳染病的診斷以及基因復(fù)制。

　　2、DNA鑒定，常見于司法鑒定領(lǐng)域。

　　3、臨床分子診斷試劑和生物試劑公司藥品研發(fā)。

　　4、轉(zhuǎn)基因、微生物、動(dòng)物源性成分檢測(cè)，常見于醫(yī)藥衛(wèi)生及農(nóng)產(chǎn)品檢驗(yàn)領(lǐng)域。

　　2、引物：是DNA復(fù)制的先鋒，就象結(jié)晶過程中的晶核，引導(dǎo)DNA的合成。在PCR擴(kuò)增中一般使用合成的寡核苷酸作引物。

　　3、DNA聚合酶(TaqDNA聚合酶)：是DNA復(fù)制的動(dòng)力，在dNTP等底物存在時(shí)在引物的引導(dǎo)下沿著模板DNA合成互補(bǔ)的DNA鏈。

　　4、緩沖液：提供DNA合成反應(yīng)所需的pH，離子強(qiáng)度等環(huán)境。

　　5、4種單核苷酸：dNTP，提供DNA合成原料。